Der Tumor-Nekrose-Faktor (TNF) spielt eine wichtige Rolle bei einem entzündlichen Zytokinsturm. Eine übermäßige Ausschüttung von TNF durch den Wirt als Reaktion auf eine Infektion verschlimmert die Krankheit. Die Höhe der TNF-Expression korreliert positiv mit der Sterblichkeit, die durch einige bakterielle Infektionen verursacht wird. Daher kann der Einsatz von TNF-Antikörpern die Entzündung lindern, um bakterielle Infektionen abzuwehren. Die Funktion von Fisch-TNF-b-Antikörpern bei bakteriellen Infektionen ist noch unklar. In dieser Studie wurden Infektionsmodelle des Vibrio vulnificus FJ03-X2-Stammes mit hoher Pathogenität und starker Virulenz in Zebrafisch (Danio rerio) Fibroblasten-Zelllinie (ZF4-Zellen) und Zebrafisch etabliert. Das Zebrafisch-tnfb-Gen (Zetnf-b) wurde kloniert und in Escherichia coli BL21 (DE3) exprimiert, und es wurden polyklonale Zetnf-b-Antikörper hergestellt. Die Injektion des polyklonalen Zetnf-b-Antikörpers und von AG-126 vor der Infektion mit V. vulnificus konnte die Überlebensrate der Zebrabärblinge um 36,6 bzw. 46,7 % erhöhen. Die vorherige Injektion des polyklonalen Antikörpers Zetnf-b konnte die Sterblichkeit der mit V. vulnificus infizierten Zebrabärblinge wirksam verringern. Somit könnte die Therapie mit polyklonalen TNF-Antikörpern als eine wirksame Strategie zur Bekämpfung von V. vulnificus in Fischen angesehen werden.
Um die immunologischen Funktionen der SARS-CoV-2-Hauptprotease (Mpro) bei der Coronavirus-
- Krankheit 2019 (COVID-19) zu untersuchen, wurde ein polyklonaler Antikörper gegen Mpro entwickelt. Methoden Ein kodon-optimiertes SARS-CoV-2 Mpro-Gen wurde synthetisiert und in einen pET-28a-Vektor ligiert, um ein rekombinantes Plasmid mit der Bezeichnung pET-28a-Mpro herzustellen.
- Anschließend wurde dieses Plasmid in kompetente E.coli Rosetta (DE3)-Zellen transformiert, um Mpro unter optimierten Bedingungen zu exprimieren, und anschließend wurde Mpro mit einer HisTrap-Chelatierungssäule gereinigt. Das gereinigte Mpro wurde als Immunogen zur Inokulation von Ratten verwendet, und das Serum wurde nach dem dritten Immunisierungszyklus gesammelt.
- Der Titer, die Selektivität und die Empfindlichkeit des polyklonalen Antikörpers gegen Mpro wurden mittels ELISA und Western-Blot-Analyse analysiert.
- Ergebnisse Es wurde eine optimierte Expressionsbedingung für Mpro in E.coli-Zellen bestimmt, und das rekombinante Mpro wurde mit einer HisTrap-Chelatierungssäule gereinigt. Die ELISA- und Western-Blot-Analyse zeigte, dass der hochempfindliche polyklonale Antikörper gegen Mpro speziell das rekombinante Mpro erkannte, und der Titer erreichte 1:256 000.
- Schlussfolgerung: Der hochspezifische polyklonale Antikörper gegen SARS-CoV-2 Mpro wurde erfolgreich hergestellt, was eine experimentelle Grundlage für die Untersuchung der immunologischen Funktion von Mpro in COVID-19 darstellt.
Das schwere akute respiratorische Syndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) hat die dringende Entwicklung neuer Therapien erforderlich gemacht, von denen eine passive Immuntherapie in Betracht gezogen wird.
- CoviFab (INM005) ist ein RBD-spezifisches F(ab‘)2-Fragment, das aus polyklonalen Antikörpern von Pferden gewonnen wird. Wir untersuchen ihre präklinische Sicherheit und Biodistribution durch in vivo und ex vivo NIR-Bildgebung nach intravenöser Verabreichung einer Dosis von 4 mg/kg zum Zeitpunkt 0 und 48 h.
- Bilder wurden 1, 12, 24, 36, 48, 49, 60, 72, 84, 96, 108, 120, 132 und 144 h nach der ersten intravenösen Injektion aufgenommen. Nach 96 und 144 Stunden wurden die Mäuse für hämatologische und serumchemische Untersuchungen, klinische Pathologie, Histopathologie und Ex-vivo-Bildgebung getötet.
- Das Biodistributionsprofil war in allen untersuchten Organen ähnlich, mit der höchsten Fluoreszenz 1 Stunde nach jeder Injektion, die danach und bis zum Ende der Studie (144 Stunden) allmählich abnahm. Die toxikologische Studie ergab keine signifikanten Veränderungen bei den hämatologischen und serumchemischen Parametern.
- Auch bei der groben und histologischen Untersuchung der Organe gab es keine Veränderungen. Die nichtklinischen Daten der aktuellen Studie bestätigen, dass CoviFab sicher ist und bei Mäusen keine unerwünschten Wirkungen beobachtet werden können. Darüber hinaus bestätigen wir, dass Bioimaging-Studien ein nützlicher Ansatz in präklinischen Studien sind, um die Biodistribution zu bestimmen.
- Beim primitivsten kieferlosen Wirbeltier, dem Neunauge, spielt die komplementabhängige Zytotoxizität, die durch variable Lymphozytenrezeptoren (VLRs) reguliert wird, gentaur eine wichtige Rolle bei der adaptiven Immunität. Unsere früheren Studien haben gezeigt, dass das porenbildende Protein des Neunauges (LPFP) als terminaler Effektor der VLR fungiert, um die Zielzellen zu lysieren und zu töten.
- Hier wurde das rekombinante GST-LPFP-Protein in einem prokaryotischen Expressionssystem exprimiert und gereinigt und dann als Immunogen für die Herstellung von monoklonalen Maus-Antikörpern und polyklonalen Kaninchen-Antikörpern verwendet.
- Mit diesen Antikörpern konnten wir nachweisen, dass LPFP in Form von Homodimeren im Neunaugenserum vorliegt und nach Stimulation an die Membran von Zielzellen rekrutiert werden kann. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die von uns hergestellten Antikörper das LPFP-Protein spezifisch erkennen können, was sich als nützliches Instrument zur weiteren Untersuchung des porenbildenden Mechanismus von LPFP erweisen könnte.
Die Coronavirus-Krankheit 2019 (COVID-19) ist eine akute Infektionskrankheit der Atemwege,
die durch eine Infektion mit dem schweren akuten respiratorischen Syndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) verursacht wird. Als Reaktion auf die rasche Ausbreitung von COVID-19 hat die US-amerikanische Arzneimittelbehörde FDA weltweit mehrere Therapeutika und Impfstoffe im Rahmen einer Notfallzulassung zugelassen. Die Wirksamkeit dieser Behandlungen wird jedoch durch virale Escape-Mutationen in Frage gestellt. Es besteht ein dringender Bedarf an der Entwicklung wirksamer Behandlungen, die vor einer SARS-CoV-2-Infektion schützen, und an der Etablierung eines stabilen Wirkungsscreening-Modells zur Erprobung potenzieller Medikamente. Polyklonale Antikörper (pAbs) haben bei solchen Entwicklungen einen wesentlichen Vorteil, da sie aufgrund der Komplexität ihrer Bindungsepitope auf schnell mutierende Virusstämme abzielen können.
In dieser Studie haben wir Anti-Rezeptor-Bindungsdomänen (Anti-RBD) pAbs aus Kaninchenserum hergestellt und ihre Sicherheit und Wirksamkeit als Reaktion auf eine SARS-CoV-2-Infektion sowohl in vivo als auch ex vivo getestet. Primäre humane zweidimensionale (2-D) Organoide des Bronchialepithels wurden kultiviert und zu einer reifen Morphologie differenziert und anschließend für die SARS-CoV-2-Infektion und das Wirkstoffscreening eingesetzt. Die pAbs schützten die Organoide der Atemwege vor viraler Infektion und Gewebeschäden. Mögliche Nebenwirkungen wurden in Mausmodellen sowohl bei Inhalation als auch bei Veneninjektion getestet. Die pAbs zeigten wirksame Virusneutralisierungseffekte ohne signifikante Nebenwirkungen. Somit könnte die Verwendung von aus tierischem Immunserum gewonnenen pAbs eine potenzielle Therapie zum Schutz vor einer SARS-CoV-2-Infektion sein, wobei die zur Herstellung dieser pAbs entwickelte Strategie neue Erkenntnisse über die Behandlung von Atemwegsinfektionen liefert, insbesondere bei Infektionen mit Viren, die einer schnellen Mutation unterliegen.
Wir haben das rekombinante trimere Spike (S)-Glykoprotein in der Präfusionskonformation zur Immunisierung von Pferden für die Produktion von Hyperimmunglobulinen gegen SARS-CoV-2 verwendet.
Die mittels ELISA gemessenen Serum-Antikörpertiter lagen über 1:106, und der neutralisierende Antikörpertiter gegen das authentische Virus (WT) betrug 1:14.604 (Durchschnitt PRNT90). Plasma von immunisierten Tieren wurde mit Pepsin verdaut, um den Fc-Anteil zu entfernen, und gereinigt, so dass ein F(ab‘)2-Präparat mit PRNT90-Titern entstand, die 150-mal höher waren als die neutralisierenden Titer im menschlichen Rekonvaleszenzplasma. Challenge-Studien wurden an Hamstern durchgeführt und zeigten die in vivo Fähigkeit von equinem F(ab‘)2, die Viruslast im Lungengewebe zu reduzieren, sowie eine signifikante klinische Verbesserung, die durch Gewichtszunahme bestimmt wurde. Die Neutralisierungskurve von F(ab‘)2 war gegen die WT- und die P.2-Variante ähnlich, aber gegen die P.1 (Gamma)-Variante um 0,39 log-Einheiten höher. Diese Ergebnisse unterstützen die Möglichkeit der Verwendung von F(ab‘)2-Pferdepräparaten für die klinische Behandlung von COVID-Patienten.
Das Gen RPS14 (ribosomales Protein S14) hält die normalen physiologischen Aktivitäten des Körpers aufrecht, indem es die Biosynthese von Ribosomen und die Übersetzung wichtiger Proteine reguliert. Ziel dieser Studie ist es, die mögliche Rolle von RPS14 beim Broiler-Aszites-Syndrom (BAS) zu untersuchen. Wir stellten erfolgreich polyklonale Antikörper gegen RPS14 her und untersuchten die Lokalisierung und Expression des RPS14-Proteins in einer Reihe von tierischen Schlüsselgeweben. In diesem Experiment wurde das rekombinante Expressionsplasmid PET28a-RPS14 mit Hilfe der prokaryotischen Expressionstechnologie für Fremdgene hergestellt. Unter den Bedingungen der IPTG-Induktion wurde ein His-RPS14-Protein mit einem Molekulargewicht von etwa 22 kDa exprimiert, und das gereinigte rekombinante Protein wurde als Antigen zur Herstellung von Kaninchen-Anti-Hühner-Serum verwendet.
Western-Blot-Ergebnisse zeigten, dass das Serum das RPS14-Protein in wichtigen Geweben von Masthühnern spezifisch identifizieren konnte. Die Immunfluoreszenz in Verbindung mit der Homologieanalyse zeigte, dass das Antiserum eine signifikante Speziesspezifität aufwies. Im Vergleich zu anderen Tierarten war die Expression dieses Proteins in wichtigen Geweben von Masthähnchen und Enten signifikant höher. Noch wichtiger ist, dass Western Blotting und Immunfluoreszenz zeigten, dass BAS die Expression von RPS14 deutlich reduzierte. Dies ist ein weiterer Hinweis darauf, dass das RPS14-Protein als einer der wichtigsten Ansatzpunkte für die BAS-Forschung genutzt werden kann.