Das Gen RPS14 (ribosomales Protein S14) hält die normalen physiologischen Aktivitäten des Körpers aufrecht, indem es die Biosynthese der Ribosomen und die Übersetzung wichtiger Proteine reguliert. Ziel dieser Studie ist es, die mögliche Rolle von RPS14 beim Broiler-Aszites-Syndrom (BAS) zu untersuchen. Wir stellten erfolgreich polyklonale Antikörper gegen RPS14 her und untersuchten die Lokalisierung und den Ausdruck des RPS14-Proteins in einer Reihe von tierischen Schlüsselgeweben. In diesem Experiment wurde das rekombinante Expressionsplasmid PET28a-RPS14 mit Hilfe der prokaryotischen Expressionstechnologie für Fremdgene hergestellt. Unter den Bedingungen der IPTG-Induktion wurde ein His-RPS14-Protein mit einem Molekulargewicht von etwa 22 kDa exprimiert, und das gereinigte rekombinante Protein wurde als Antigen zur Herstellung von Kaninchen-Anti-Hühner-Serum verwendet. Western-Blot-Ergebnisse zeigten, dass das Serum das RPS14-Protein in wichtigen Geweben von Masthühnern spezifisch identifizieren konnte. Die Immunfluoreszenz in Verbindung mit der Homologieanalyse zeigte, dass das Antiserum eine signifikante Speziesspezifität aufwies. Im Vergleich zu anderen Tierarten war die Expression dieses Proteins in wichtigen Geweben von Masthähnchen und Enten signifikant höher. Noch wichtiger ist, dass Western Blotting und Immunfluoreszenz zeigten contact gentaur dass BAS die Expression von RPS14 deutlich reduzierte. Dies ist ein weiterer Hinweis darauf, dass das RPS14-Protein als einer der wichtigsten Ansatzpunkte für die BAS-Forschung genutzt werden kann.
Ziel dieser Studie war es, die Rolle eines Stimulators des Interferon (IFN)-Gens (STING)-Agonisten bei der Immuntherapie von Brustkrebs (BCa) zu untersuchen.
- Es wurden klinische Proben von 37 Patientinnen mit BCa gesammelt. Durch die Injektion von 4T1-Zellen in das Brustfettpolster von Mäusen wurde ein tumortragendes Mausmodell geschaffen.
- Der STING-Agonist und Atezolizumab wurden den Mäusen 2 Wochen lang zweimal wöchentlich injiziert. Von den tumortragenden Mäusen wurden peripheres Blut, Tumormasse, Lunge, Leber, Hirnrinde und Nierenproben entnommen.
- Zur Behandlung von 4T1-Zellen wurde Anti-IFN-alpha-Rezeptor-Untereinheit 1 (IFNAR1) verwendet. Das Tumorgewebe von BCa-Patienten wies eine geringere STING- und eine hohe Expression der Proteine Programmed Cell Death Protein 1 und Programmed Death Ligand 1 auf.
- Der STING-Agonist hemmte das Wachstum von 4T1-Zellen in Mäusen (P < 0,001) und erhöhte den IFN-β-Spiegel und die Phosphorylierung von STING, TBK1, IRF3 und STAT1 in der Tumormasse von Mäusen, die einen Tumor trugen (P < 0,001). Es wirkte synergistisch mit Atezolizumab, um das Wachstum von 4T1-Zellen in Mäusen zu hemmen, und erhöhte die Spiegel von Tumornekrosefaktor-α, IFN-β, Interleukin-10 und IFN-γ im peripheren Blut und in der Tumormasse (P < 0,01).
- Es wirkte synergistisch mit Atezolizumab, um CD8+ zytotoxische T-Zellen zu erhöhen und FOXP3+ Treg-Zellen im tumortragenden Mausmodell zu verringern. Der STING-Agonist war für Lunge, Leber, Hirnrinde und Niere ungiftig. Anti-IFNAR1 hob die Wirkung des STING-Agonisten auf die TBK1-, IRF3- und STAT1-Phosphorylierung in 4T1-Zellen auf (P < 0,01). STING-Agonisten verstärken die Wirksamkeit von Atezolizumab in der BCa-Immuntherapie durch die Aktivierung des IFN-β-Signalweges.
- Die Neutralisierung des tödlichen Toxins von Bacillus anthracis ist ein wichtiges Thema sowohl in der Grundlagenmedizin als auch in der praktischen Gesundheitsversorgung, wenn es um die Bekämpfung hochgefährlicher Infektionen geht.
- Wir haben einen neutralisierenden monoklonalen Antikörper 1E10 gegen das tödliche Toxin von Bacillus anthracis entwickelt und die Stadien der Rezeptorinteraktion zwischen dem schützenden Antigen (PA) und der Oberfläche eukaryontischer Zellen, die Bildung von PA-Oligomeren, den Zusammenbau des tödlichen Toxins (LT) und seine Translokation durch Endozytose in die eukaryontische Zelle, gefolgt von der Bildung einer echten Pore und der Freisetzung von LT in das Zellzytosol beschrieben.
- Es wurde gezeigt, dass der Antikörper selektiv in der Phase der Interaktion zwischen Bacillus anthracis und der eukaryontischen Zelle wirkt, und der Mechanismus der toxinneutralisierenden Aktivität des 1E10-Antikörpers wurde aufgezeigt. Es wurde festgestellt, dass die Interaktion zwischen dem monoklonalen Antikörper 1E10 und PA zu einer Hemmung der enzymatischen Aktivität des Letalfaktors (LF) führt, was höchstwahrscheinlich auf eine Störung der echten Porenbildung durch PA zurückzuführen ist, die die Freisetzung von LF in das Zytosol blockiert.
Dengue-Fieber ist die häufigste arbovirale Erkrankung des Menschen in tropischen und subtropischen Regionen, insbesondere in städtischen Gebieten, und kann große Epidemien auslösen.
- Obwohl es sich um eine selbstlimitierende Krankheit handelt, kann sie manchmal schwere hämorrhagische Manifestationen aufweisen, und der Ausgang des hämorrhagischen Dengue-Fiebers hat ähnliche klinische Manifestationen wie bei anderen Infektionen, die zum Tod führen können.
- Daher sind unter bestimmten Umständen, wie z. B. bei hämorrhagischen Fiebern, Autopsien erforderlich, um die Diagnose zu bestätigen oder zu klären, was epidemiologische Konsequenzen haben kann. Normalerweise erhält das Labor für Immunhistochemie des Pathologiezentrums des Adolfo-Lutz-Instituts Autopsieproben aus verschiedenen Krankenhäusern im Bundesstaat Sao Paulo, um eine frühere Diagnose zu bestätigen, insbesondere bei hämorrhagischem Fieber infektiöser Ätiologie.
- Für diese Diagnose haben wir einen polyklonalen Maus-Antikörper gegen das Dengue-Virus verwendet, der oft keine eindeutige Schlussfolgerung zulässt, da eine Hintergrundfärbung oder keine relevante Immunfärbung vorliegt, was die histopathologische Analyse erschwert. Dementsprechend wurde in der vorliegenden Studie ein monoklonaler Anti-DENV-NS1-Antikörper (4H2) getestet, um seine Genauigkeit bei der immunhistochemischen Analyse zu ermitteln.
- Vierundzwanzig Autopsiefälle mit hämorrhagischem Fiebersyndrom, die histopathologische Veränderungen aufwiesen, die mit der Dengue-Krankheit vereinbar waren, wurden untersucht: Zwanzig Fälle wurden durch RT-PCR für DENV-2 und in vier Fällen durch RT-PCR für das Gelbfiebervirus bestätigt. Proben von autopsierten Todesfällen, die durch andere Infektionskrankheiten verursacht wurden (zwei Fälle von Meningitis C und zwei Fälle von schwerem akutem respiratorischem Syndrom, verursacht durch Influenza A H1N1), wurden als negative Kontrollfälle einbezogen.
- Eine positive Immunfärbung für DENV-NS1 wurde in 16/20 (80 %) Leberproben und 11/15 (73 %) Milzproben von autopsierten hämorrhagischen Dengue-Patienten festgestellt, während der polyklonale Antikörper DENV-Antigene in 12/20 (60 %) Leber- und in 6/15 (40 %) Milzproben derselben Fälle nachwies. Bei Leberbiopsieproben von Gelbfieber- oder Neisseria meningitides- und Flu-A-Fällen wurden keine positiven Ergebnisse erzielt.
- 4H2 mAb erkennt das native Protein der vier DENV-Serotypen in infizierten Zellen und reagierte im immunhistochemischen Test nicht mit nativen ZIKV- oder CHKV-infizierten Zellen, so dass es ein nützliches Hilfsmittel für die differenzierte histopathologische Bestimmung von akuten febrilen hämorrhagischen Todesfällen ist.
Das Zytokinfreisetzungssyndrom (CRS) ist eine unerwünschte Immunreaktion, die nach der Verabreichung neuer biologischer Therapien gefährliche Nebenwirkungen verursachen kann.
In-vitro-Tests zur Zytokinfreisetzung (CRA) werden zur präklinischen Sicherheitsbewertung vor der Verabreichung der ersten Dosis therapeutischer monoklonaler Antikörper (mAbs) beim Menschen eingesetzt. Es wurde eine Vielzahl von CRA-Plattformen entwickelt, mit denen die sezernierten Zytokine analysiert werden können. Die Analyse von T-Zell-Aktivierungsmarkern wird bei CRA-Plattformen nicht routinemäßig durchgeführt, und nur wenige Studien haben die intrazellulären Zytokinspiegel nach Stimulation mit therapeutischen mAbs beschrieben. In der vorliegenden Studie haben wir eine CRA durchgeführt, bei der intrazelluläre Zytokine gefärbt und extrazelluläre T-Zell-Aktivierungsmarker durchflusszytometrisch bestimmt wurden. Für die Stimulierung der mononukleären Zellen des peripheren Blutes (PBMCs) verwendeten wir handelsübliche Referenz-MAbs.
Es zeigte sich, dass die Stimulierung mittels Trockenbeschichtung in fester Phase (SP) mit zwei verschiedenen CD28-Antikörpern und Muromonab-CD3 den Anteil der IFN-ɣ + CD4+ und CD8+ T-Zellen sowie der CD3-CD56+ NK-Zellen im Vergleich zur Stimulierung mit Antikörpern in wässriger Phase (AP) erhöhte. Die Expression der T-Zell-Aktivierungsmarker CD25 und CD69 auf CD4+ und CD8+ T-Zellen war nach SP-Muromonab-CD3-Stimulation ebenfalls erhöht. Mit Hilfe der Multiplex-Zytokin-Bewertung konnten wir zeigen, dass die Stimulation in AP mit ANC28.1, CD28.2 und muromonab-CD3 zu einer erhöhten Sekretion von IFN-ɣ, GM-CSF, TNF-α und IL-2 führte. Die Stimulierung von PBMCs, die in einer Kultur mit hoher Dichte vorinkubiert wurden, führte zu einem Anstieg der IFN-ɣ-Produktion, nicht aber der Expression von Aktivierungsmarkern im Vergleich zu einer Kultur mit niedriger Dichte. Unsere Ergebnisse zeigen, dass durchflusszytometrische Analysen zur Bewertung relevanter T-Zell- und NK-Zell-Marker als Ergänzung zur Multiplex-Zytokin-Analyse in CRAs verwendet werden können. Dieser Ansatz kann eine wertvolle Ergänzung sein, die eine genauere Beschreibung der Mechanismen ermöglicht, die zu CRS führen.