2X Universal SYBR Green Fast qPCR-Mix

Einführung
Die quantitative Echtzeit-PCR (qPCR) ist eine leistungsstarke Technik zum Nachweis des anfänglichen DNA-Eintrags in eine PCR-Reaktion durch Akkumulation von Fluoreszenzsignalen. Der DNA-Doppelstrang-gebundene Farbstoff SYBR Green I ist der am häufigsten verwendete Farbstoff in der qPCR.

ABclonal 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix enthält einen neuartigen universellen Referenzfarbstoff, der eine höhere Signalauflösung realisieren kann und für alle derzeit verwendeten qPCR-Instrumente geeignet ist (einschließlich Maschinen mit hohem ROX-Modus, niedrigem ROX-Modus und ohne ROX-Modus). Es auch enthält Hot-Start Taq DNA-Polymerase, um unerwartete Amplifikationsergebnisse zu vermeiden.
Außerdem ist ABclonal 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix ein optimierter qPCR-Reaktionsmix. Er enthält alle erforderlichen Komponenten in qPCR außer Primern und Template. Es ist bequem für Experimente und für mehrere Arten geeignet. Die oben genannten Eigenschaften machen es zu einem idealen Experimentierwerkzeug für die quantitative Genforschung.

Instrumente

Es ist kein zusätzlicher Referenzfarbstoff erforderlich. ABclonal 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix ist für alle derzeit verwendeten qPCR-Instrumente geeignet (einschließlich High-ROX-Modus, Low-ROX-Modus und No-ROX-Modus erforderlich).

Benötigte Materialien
1. EP-Röhrchen, PCR-Röhrchen und andere verwandte Materialien.
2. qPCR-spezifische Primer und Templates.
3. qPCR-Platten und Siegelmembran.

Nutzungshinweise
1. Bevor Sie den 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix verwenden, stellen Sie bitte sicher, dass der Mix vollständig aufgetaut ist und stellen Sie ihn dann zur Verwendung auf Eis.
2. Mischen Sie andere qPCR-Komponenten mit Mix gründlich und vorsichtig durch Pipettieren oder Vortexen. Stellen Sie den Mix nach Gebrauch wieder auf -20 ℃ für eine längere Lagerung oder 4 ℃ für eine kurzzeitige Verwendung.
3. 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix enthält Taq-Polymerase, alle Vorgänge sollten auf Eis durchgeführt werden.
4. 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix enthält einen speziell entwickelten Referenzfarbstoff, der für alle derzeit verwendeten qPCR-Geräte geeignet ist. Es sollten keine zusätzlichen ROX-ähnlichen Referenzfarbstoffe hinzugefügt werden.
5. Zur Vermeidung von Kontaminationen werden Pipettenspitzen mit Filtern empfohlen.
6. Um bessere qPCR-Ergebnisse zu garantieren, wird ein DNA-Template in guter Qualität empfohlen.

Experiment:

(1) Lösen Sie den 2X Universal SYBR Green Fast qPCR-Mix bei Raumtemperatur auf und legen Sie ihn dann zur weiteren Verwendung auf Eis. Rühren Sie die Mischung vor Gebrauch gründlich um und zentrifugieren Sie sie, um die gesamte Lösung zu sammeln.
(2) Berechnen Sie die erforderliche Mischungsmenge, im Allgemeinen wird eine zusätzliche Menge von 10 % empfohlen.
(3) Lösung im Falle einer Kontamination in sterile PCR- oder EP-Röhrchen geben.
(4) Fügen Sie alle in der obigen Tabelle aufgeführten Komponenten hinzu, schütteln Sie die Röhrchen vorsichtig, um sie gründlich zu mischen (vermeiden Sie Blasen) und zentrifugieren Sie sie.
(5) Geben Sie die Reaktionslösung in qPCR-Platten und versiegeln Sie die Platten mit optischer Membran.
(6) Zentrifugieren Sie die qPCR-Platten bei 2500 U/min, um die gesamte Lösung zu sammeln.

Datenanalyse:

1. Zeichnen Sie eine Standardkurve gemäß den Ct-Werten des endogenen Gens. Der Wert von R2 sollte mehr als 0,98 betragen und die Steigung der Kurve sollte im Bereich von -3 bis -3,5 liegen, was die PCR bedeutet
Die Verstärkungseffizienz liegt im Bereich von 90 % bis 120 %.
2. Die Standardabweichung (STD) der Ct-Werte sollte weniger als 0,2 betragen und die Variation des Ct-Werts für verschiedene Experimente sollte weniger als 0,5 betragen (der Schwellenwert verschiedener Experimente sollte sein dasselbe beim Vergleich der Ct-Werte).
3. Die einzelne Schmelzkurve zeigt keine unspezifischen Amplifikationsprodukte oder Primer-Dimmer an, und der Tm-Wert in der Schmelzkurve liegt normalerweise im Bereich von 80 bis 95 ℃.

Fehlerbehebung

1) Schmelzkurve zeigt mehrere Peaks
a. Primer-Design : Entwerfen Sie den Primer gemäß den grundlegenden Primer-Design-Protokollen.
b. Primer-Konzentration zu hoch: Verringern Sie die Primer-Konzentration
2) Ungewöhnliche Verstärkungskurven
a. Amplifikationskurve nicht glatt: Zu niedriges Amplifikationssignal, erhöhen Sie die Template-Eingabe und stellen Sie sicher, dass der qPCR-Mix ordnungsgemäß gelagert wird.
b. Inkonsistente Amplifikationskurve: Blasen verursachen anormale qPCR-Ergebnisse, zentrifugieren Sie die Platte, bevor Sie sie laufen lassen.
c. Anormale Amplifikationskurven: Der Standardgrundlinienwert des Geräts ist auf 3 bis 15 eingestellt, die Grundlinieneinstellung kann entsprechend den tatsächlichen Amplifikationsbedingungen geändert werden. Außerdem kann die Verschlechterung der Vorlage die Kurve beeinflussen.
3) Keine Amplifikationskurven nach der Reaktion
a. Nicht genügend PCR-Zyklen: Die Anzahl der PCR-Zyklen ist normalerweise auf 40 eingestellt. Es sollte beachtet werden, dass eine höhere Anzahl von Zyklen die Anzahl erhöhen kann
Hintergrundsignal.
b. Primerabbau: Verwenden Sie Elektrophorese, um die Integrität der Primer zu bestätigen.
c. Bestätigen Sie den Signalerfassungsschritt: Der Signalerfassungsschritt wird normalerweise so eingestellt, dass er nach dem Ausheilungs-Verlängerungsschritt für zwei Schritte erfolgt
qPCR und nach Verlängerungsschritt für dreistufige qCPR.
d. Vorlageneingabe zu niedrig:Erhöhen Sie die Vorlagenkonzentration oder fügen Sie zusätzliche Wiederholungen hinzu.
a. Vorlagenabbau: Verwenden Sie eine frisch zubereitete Vorlage (Verwenden Sie eine Elektrophorese, um die Integrität der Vorlage zu bestätigen)
b. Nicht genügend anfängliche Denaturierungszeit: 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix verwendet Hot-Start Taq-Polymerase, die Vordenaturierung Die Zeit sollte mindestens 3 Minuten betragen.          4) Ct-Wert zu spät
c. Niedrige Amplifikationseffizienz: Optimieren Sie die Reaktionsbedingungen oder wechseln Sie den Primer.
d. Template Input Too Low: Erhöhen Sie die Template-Konzentration oder fügen Sie eine zusätzliche Wiederholung hinzu
e. Vorlagenabbau: Verwenden Sie eine frisch zubereitete Vorlage (Verwenden Sie eine Elektrophorese, um die Integrität der Vorlage zu bestätigen)
f. Zu lange PCR-Produkte: Die Länge der Amplifikationsprodukte liegt normalerweise im Bereich von 70 bp bis 200 bp.
g. PCR Inhabitation Reagent:Verwenden Sie eine neue Vorlage oder verdünnen Sie die Vorlage.
h. Zu kurze Vordenaturierungszeit: 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix enthält Hot-Start Taq-Polymerase, die Vordenaturierungszeit sollte mindestens 3 Minuten betragen.
5) NTC zeigt die Verstärkung an
a. Kontamination: Verwenden Sie steriles Wasser, um das Experiment durchzuführen, und es wird empfohlen, alle Vorgänge in einem Reinraum durchzuführen, um Aerosole zu vermeiden Kontamination.
b. Unspezifische PCR-Produkte: Analyse mit Schmelzkurve.
6) Inkonsistente Ergebnisse
c. Inkonsistente Probe hinzugefügt: Verwenden Sie die richtigen Pipettiertechniken
d. Inkonsistente Temperatur im qPCR-Gerät: Stellen Sie eine regelmäßige Gerätekalibrierung sicher.
e. Template Concentration Too Low:Je niedriger die Template-Eingabe, desto schlechter das qPCR-Ergebnis. Erhöhen Sie die Template-Konzentration.

2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix

RK21203 Abclonal 1 mL Ask for price

Genious 2X SYBR Green Fast qPCR Mix

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2x SYBR Green qPCR Master Mix

B21202 Bimake 5 mL 224 EUR

2x SYBR Green qPCR Master Mix

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2x SYBR Green qPCR Master Mix (High ROX)

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2x SYBR Green qPCR Master Mix (High ROX)

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2x SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX)

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2x SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX)

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SYBR Green qPCR Master Mix

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AceQ Universal SYBR qPCR Master Mix

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Ultra SYBR Green qPCR Master Mix (2X, with ROX I)

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Ultra SYBR Green qPCR Master Mix (2X, with ROX I)

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MQ101-01 Vazyme 125 rxn(20 μl/rxn) 138 EUR

miRNA Universal SYBR® qPCR Master Mix

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SYBR Green qPCR Master Mix (High ROX)

HY-K0521 MedChemExpress 1 mL (100 rxns) 113 EUR

SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX)

HY-K0522 MedChemExpress 5 mL (500 rxns ) 257 EUR

SYBR Green qPCR Master Mix (No ROX)

HY-K0523 MedChemExpress 5 mL (500 rxns ) 257 EUR

AceQ qPCR SYBR® Green Master Mix

Q111-02 Vazyme 500 rxn (20 μl/rxn) 221 EUR

AceQ qPCR SYBR® Green Master Mix

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Genious 2X SYBRGREEN FAST qPCR MIX (Low ROX)

RK21206 Abclonal 1 ml Ask for price

HotTaq Probe qPCR Universal Mix

BT11004 Bioatlas 250rxn 123 EUR

HotTaq EvaGreen qPCR Universal Mix

BT11104 Bioatlas 250rxn 138 EUR

Entrans 2X qPCR Probe Master Mix

RK21208 Abclonal 40 RXN Ask for price

Eztime Real - time PCRPremix 2x,SYBR Green

FYT103-100P Yeastern Biotech 100 Preps 1.25 ml Ask for price

Eztime Real - time PCRPremix 2x,SYBR Green

FYT103-400P Yeastern Biotech 400 Preps 1.25 ml x 4 Ask for price

HotStart PCR Master mix (2X, Green Dye)

BS9291 Bio Basic 5X1mL, 5ml 209.5 EUR

HotStart PCR Master mix (2X, Green Dye)

BS9292 Bio Basic 1ml 96.4 EUR

ABScript II One Step SYBR Green RT-qPCR Kit

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SYBR Green I

B1747-25 Biovision 1164 EUR

SYBR Green I

B1747-5 Biovision 387 EUR

Universal qPCR Mixture

QPCR1000-UNIV Bio Basic 4X1.25ml 276.2 EUR

Fast EvaGreen Master Mix for qPCR(200 rxn)

31003 Biotium 2x1ML 204 EUR

Fast EvaGreen Master Mix for qPCR (500 rxn)

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Fast EvaGreen Master Mix for qPCR (5000 rxn)

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Fast Plus EvaGreen qPCR Master Mix (200 rxn)

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Fast Plus EvaGreen qPCR Master Mix (500 rxn)

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Fast Plus EvaGreen qPCR Master Mix (5000 rxn)

31020-2 Biotium 50x1mL 3576 EUR

Green qPCR SuperMix

20-abx098031 Abbexa
  • 1038.00 EUR
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  • 15 ml
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EZSolution? SYBR Green I

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EZSolution? SYBR Green I

B1748-500 Biovision 430 EUR

ACCUZYME Mix, 2x

BIO-25028 Bioline 500 Reactions Ask for price

MyTaq Mix, 2x

BIO-25041 Bioline 200 Reactions Ask for price

MyTaq Mix, 2x

BIO-25041/S Bioline Sample Ask for price

MyTaq Mix, 2x

BIO-25042 Bioline 1000 Reactions Ask for price

MyFi Mix, 2x

BIO-25049 Bioline 100 Reactions Ask for price

MyFi Mix, 2x

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MyFi Mix, 2x

BIO-25050 Bioline 500 Reactions Ask for price

Ranger Mix, 2x

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BIO-25052 Bioline 500 Reactions Ask for price

OPTIONAL GREEN FILTER (572NM)

GDBL-GREEN CORNING 1/pk 1052 EUR

Fast Green FCF

FB0452 Bio Basic 5g 55.22 EUR

Fast Green FCF

HY-D0914 MedChemExpress 500mg 108 EUR

Fast Green FCF

abx082188-5g Abbexa 5 g 203 EUR

Fast Green Solution

FGN125 ScyTek Laboratories 125 ml 66 EUR

Fast Green Solution

FGN500 ScyTek Laboratories 500 ml 96 EUR

Fast Green Solution

FGN999 ScyTek Laboratories 1000 ml 124 EUR

Green Taq Mix

P131-01 Vazyme 5 ml 119 EUR

Green Taq Mix

P131-02 Vazyme 15 ml 150 EUR

Green Taq Mix

P131-03 Vazyme 50 ml 248 EUR

Fast EvaGreen Master Mix for qPCR, trial size (100 rxn)

31003-T Biotium 1ML 123 EUR

Fast Plus EvaGreen qPCR Master Mix (trial size, 100 rxn)

31020-T Biotium 1mL 134 EUR

Green qPCR SuperMix UDG

20-abx098032 Abbexa
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Top Green qPCR SuperMix

20-abx098033 Abbexa
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  • 1135.00 EUR
  • 411.00 EUR
  • 15 ml
  • 1 ml
  • 25 ml
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Tip Green qPCR SuperMix

20-abx098034 Abbexa
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MyTaq Red Mix, 2x

BIO-25043 Bioline 200 Reactions Ask for price

MyTaq Red Mix, 2x

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MyTaq Red Mix, 2x

BIO-25044 Bioline 1000 Reactions Ask for price

MyTaq HS Mix, 2x

BIO-25045 Bioline 200 Reactions Ask for price

MyTaq HS Mix, 2x

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MyTaq HS Mix, 2x

BIO-25046 Bioline 1000 Reactions Ask for price

5min Universal Ligation Mix

C311-01 Vazyme 50 rxn 214 EUR

5min Universal Ligation Mix

C311-02 Vazyme 100 rxn 283 EUR

BrightGreen 2X qPCR MasterMix-iCycler

MasterMix-iC ABM 4 x 1.25 ml for 500 reactions (20 ul) 140 EUR

BrightGreen 2X qPCR MasterMix-iCycler

MasterMix-iC-XL ABM 16 x 1.25 ml for 2000 reactions (20 ul) 376 EUR

KiloGreen 2X qPCR MasterMix-iCycler

MasterMix-KC ABM 4 x 1.25 ml - 500 reactions (20 ul) 140 EUR

KiloGreen 2X qPCR MasterMix-ROX

MasterMix-KR ABM 4 x 1.25 ml - 500 reactions (20 ul) 140 EUR

TaqProbe 2X qPCR MasterMix-ROX

MasterMix-P ABM 4 x 1.25 ml for 500 reactions (20 ul) 140 EUR

TaqProbe 2X qPCR MasterMix-iCycler

MasterMix-PC ABM 4 x 1.25 ml for 500 reactions (20 ul) 140 EUR

TaqProbe 2X qPCR MasterMix-Multiplex

MasterMix-PM ABM 4 x 1.25 ml for 500 reactions (20 ul) 140 EUR

BrightGreen 2X qPCR MasterMix-ROX

MasterMix-R ABM 4 x 1.25 ml for 500 reactions (20 ul) 140 EUR

BrightGreen 2X qPCR MasterMix-ROX

MasterMix-R-XL ABM 16 x 1.25 ml for 2000 reactions (20 ul) 376 EUR

LncRNA Profiler Complete qPCR Array Kit (cDNA synthesis kit, qPCR array and SYBR Green reagent) 20 profiles

RA910A-1 SBI 20 profiles 1108 EUR

Fast Plus EvaGreen Master Mix for qPCR with Rox (200 rxn)

31014 Biotium 2x1mL 228 EUR

Fast Plus EvaGreen qPCR Master Mix with low Rox (500 rxn)

31014-1 Biotium 5x1mL 437 EUR

Fast Plus EvaGreen qPCR Master Mix with low Rox (5000 rxn)

31014-2 Biotium 50x1mL 3576 EUR

Fast Plus EvaGreen qPCR Master Mix with high Rox (500 rxn)

31015-1 Biotium 5x1mL 437 EUR

Fast Plus EvaGreen qPCR Master Mix with high Rox (5000 rxn)

31015-2 Biotium 50x1mL 3576 EUR

25G Fast Green FCF

NAT1348 National Diagnostics 25G 160 EUR

Methylamp MS-qPCR Fast Kit

P-1028 EpiGentek 200 Reactions 496.6 EUR

RT Master Mix for qPCR

HY-K0510 MedChemExpress 1 mL (100 rxns) 291 EUR

HotTaq Probe qPCR Mix (ROX)

BT11001 Bioatlas 250rxn 109 EUR

HotTaq Probe qPCR Mix (Capillary)

BT11003 Bioatlas 250rxn 109 EUR

HotTaq EvaGreen qPCR Mix (ROX)

BT11101 Bioatlas 250rxn 123 EUR

HotTaq EvaGreen qPCR Mix (Capillary)

BT11103 Bioatlas 250rxn 123 EUR

AceQ qPCR Probe Master Mix

Q112-02 Vazyme 500 rxn (20 μl/rxn) 221 EUR

f. Inkonsistenter Grenzwertsatz: Stellen Sie beim Vergleich der qPCR-Ergebnisse in verschiedenen Platten sicher, dass der Grenzwert für alle Experimente gleich ist.

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