2X Universal SYBR Green Fast qPCR-Mix

Einführung
Die quantitative Echtzeit-PCR (qPCR) ist eine leistungsstarke Technik zum Nachweis des anfänglichen DNA-Eintrags in eine PCR-Reaktion durch Akkumulation von Fluoreszenzsignalen. Der DNA-Doppelstrang-gebundene Farbstoff SYBR Green I ist der am häufigsten verwendete Farbstoff in der qPCR.

ABclonal 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix enthält einen neuartigen universellen Referenzfarbstoff, der eine höhere Signalauflösung realisieren kann und für alle derzeit verwendeten qPCR-Instrumente geeignet ist (einschließlich Maschinen mit hohem ROX-Modus, niedrigem ROX-Modus und ohne ROX-Modus). Es auch enthält Hot-Start Taq DNA-Polymerase, um unerwartete Amplifikationsergebnisse zu vermeiden.
Außerdem ist ABclonal 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix ein optimierter qPCR-Reaktionsmix. Er enthält alle erforderlichen Komponenten in qPCR außer Primern und Template. Es ist bequem für Experimente und für mehrere Arten geeignet. Die oben genannten Eigenschaften machen es zu einem idealen Experimentierwerkzeug für die quantitative Genforschung.

Instrumente

Es ist kein zusätzlicher Referenzfarbstoff erforderlich. ABclonal 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix ist für alle derzeit verwendeten qPCR-Instrumente geeignet (einschließlich High-ROX-Modus, Low-ROX-Modus und No-ROX-Modus erforderlich).

Benötigte Materialien
1. EP-Röhrchen, PCR-Röhrchen und andere verwandte Materialien.
2. qPCR-spezifische Primer und Templates.
3. qPCR-Platten und Siegelmembran.

Nutzungshinweise
1. Bevor Sie den 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix verwenden, stellen Sie bitte sicher, dass der Mix vollständig aufgetaut ist und stellen Sie ihn dann zur Verwendung auf Eis.
2. Mischen Sie andere qPCR-Komponenten mit Mix gründlich und vorsichtig durch Pipettieren oder Vortexen. Stellen Sie den Mix nach Gebrauch wieder auf -20 ℃ für eine längere Lagerung oder 4 ℃ für eine kurzzeitige Verwendung.
3. 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix enthält Taq-Polymerase, alle Vorgänge sollten auf Eis durchgeführt werden.
4. 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix enthält einen speziell entwickelten Referenzfarbstoff, der für alle derzeit verwendeten qPCR-Geräte geeignet ist. Es sollten keine zusätzlichen ROX-ähnlichen Referenzfarbstoffe hinzugefügt werden.
5. Zur Vermeidung von Kontaminationen werden Pipettenspitzen mit Filtern empfohlen.
6. Um bessere qPCR-Ergebnisse zu garantieren, wird ein DNA-Template in guter Qualität empfohlen.

Experiment:

(1) Lösen Sie den 2X Universal SYBR Green Fast qPCR-Mix bei Raumtemperatur auf und legen Sie ihn dann zur weiteren Verwendung auf Eis. Rühren Sie die Mischung vor Gebrauch gründlich um und zentrifugieren Sie sie, um die gesamte Lösung zu sammeln.
(2) Berechnen Sie die erforderliche Mischungsmenge, im Allgemeinen wird eine zusätzliche Menge von 10 % empfohlen.
(3) Lösung im Falle einer Kontamination in sterile PCR- oder EP-Röhrchen geben.
(4) Fügen Sie alle in der obigen Tabelle aufgeführten Komponenten hinzu, schütteln Sie die Röhrchen vorsichtig, um sie gründlich zu mischen (vermeiden Sie Blasen) und zentrifugieren Sie sie.
(5) Geben Sie die Reaktionslösung in qPCR-Platten und versiegeln Sie die Platten mit optischer Membran.
(6) Zentrifugieren Sie die qPCR-Platten bei 2500 U/min, um die gesamte Lösung zu sammeln.

Datenanalyse:

1. Zeichnen Sie eine Standardkurve gemäß den Ct-Werten des endogenen Gens. Der Wert von R2 sollte mehr als 0,98 betragen und die Steigung der Kurve sollte im Bereich von -3 bis -3,5 liegen, was die PCR bedeutet
Die Verstärkungseffizienz liegt im Bereich von 90 % bis 120 %.
2. Die Standardabweichung (STD) der Ct-Werte sollte weniger als 0,2 betragen und die Variation des Ct-Werts für verschiedene Experimente sollte weniger als 0,5 betragen (der Schwellenwert verschiedener Experimente sollte sein dasselbe beim Vergleich der Ct-Werte).
3. Die einzelne Schmelzkurve zeigt keine unspezifischen Amplifikationsprodukte oder Primer-Dimmer an, und der Tm-Wert in der Schmelzkurve liegt normalerweise im Bereich von 80 bis 95 ℃.

Fehlerbehebung

1) Schmelzkurve zeigt mehrere Peaks
a. Primer-Design : Entwerfen Sie den Primer gemäß den grundlegenden Primer-Design-Protokollen.
b. Primer-Konzentration zu hoch: Verringern Sie die Primer-Konzentration
2) Ungewöhnliche Verstärkungskurven
a. Amplifikationskurve nicht glatt: Zu niedriges Amplifikationssignal, erhöhen Sie die Template-Eingabe und stellen Sie sicher, dass der qPCR-Mix ordnungsgemäß gelagert wird.
b. Inkonsistente Amplifikationskurve: Blasen verursachen anormale qPCR-Ergebnisse, zentrifugieren Sie die Platte, bevor Sie sie laufen lassen.
c. Anormale Amplifikationskurven: Der Standardgrundlinienwert des Geräts ist auf 3 bis 15 eingestellt, die Grundlinieneinstellung kann entsprechend den tatsächlichen Amplifikationsbedingungen geändert werden. Außerdem kann die Verschlechterung der Vorlage die Kurve beeinflussen.
3) Keine Amplifikationskurven nach der Reaktion
a. Nicht genügend PCR-Zyklen: Die Anzahl der PCR-Zyklen ist normalerweise auf 40 eingestellt. Es sollte beachtet werden, dass eine höhere Anzahl von Zyklen die Anzahl erhöhen kann
Hintergrundsignal.
b. Primerabbau: Verwenden Sie Elektrophorese, um die Integrität der Primer zu bestätigen.
c. Bestätigen Sie den Signalerfassungsschritt: Der Signalerfassungsschritt wird normalerweise so eingestellt, dass er nach dem Ausheilungs-Verlängerungsschritt für zwei Schritte erfolgt
qPCR und nach Verlängerungsschritt für dreistufige qCPR.
d. Vorlageneingabe zu niedrig:Erhöhen Sie die Vorlagenkonzentration oder fügen Sie zusätzliche Wiederholungen hinzu.
a. Vorlagenabbau: Verwenden Sie eine frisch zubereitete Vorlage (Verwenden Sie eine Elektrophorese, um die Integrität der Vorlage zu bestätigen)
b. Nicht genügend anfängliche Denaturierungszeit: 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix verwendet Hot-Start Taq-Polymerase, die Vordenaturierung Die Zeit sollte mindestens 3 Minuten betragen.          4) Ct-Wert zu spät
c. Niedrige Amplifikationseffizienz: Optimieren Sie die Reaktionsbedingungen oder wechseln Sie den Primer.
d. Template Input Too Low: Erhöhen Sie die Template-Konzentration oder fügen Sie eine zusätzliche Wiederholung hinzu
e. Vorlagenabbau: Verwenden Sie eine frisch zubereitete Vorlage (Verwenden Sie eine Elektrophorese, um die Integrität der Vorlage zu bestätigen)
f. Zu lange PCR-Produkte: Die Länge der Amplifikationsprodukte liegt normalerweise im Bereich von 70 bp bis 200 bp.
g. PCR Inhabitation Reagent:Verwenden Sie eine neue Vorlage oder verdünnen Sie die Vorlage.
h. Zu kurze Vordenaturierungszeit: 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix enthält Hot-Start Taq-Polymerase, die Vordenaturierungszeit sollte mindestens 3 Minuten betragen.
5) NTC zeigt die Verstärkung an
a. Kontamination: Verwenden Sie steriles Wasser, um das Experiment durchzuführen, und es wird empfohlen, alle Vorgänge in einem Reinraum durchzuführen, um Aerosole zu vermeiden Kontamination.
b. Unspezifische PCR-Produkte: Analyse mit Schmelzkurve.
6) Inkonsistente Ergebnisse
c. Inkonsistente Probe hinzugefügt: Verwenden Sie die richtigen Pipettiertechniken
d. Inkonsistente Temperatur im qPCR-Gerät: Stellen Sie eine regelmäßige Gerätekalibrierung sicher.
e. Template Concentration Too Low:Je niedriger die Template-Eingabe, desto schlechter das qPCR-Ergebnis. Erhöhen Sie die Template-Konzentration.

2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix

RK21203 Abclonal 1 mL Ask for price

Genious 2X SYBR Green Fast qPCR Mix

RK21204 Abclonal 1 mL Ask for price

AceQ Universal SYBR qPCR Master Mix

Q511-02 Vazyme 500 rxn (20 μl/rxn) 265.2 EUR

AceQ Universal SYBR qPCR Master Mix

Q511-03 Vazyme 2500 rxn (20 μl/rxn) 775.2 EUR

ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix

Q711-02 Vazyme 500 rxn (20 μl/rxn) 265.2 EUR

ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix

Q711-03 Vazyme 2500 rxn (20 μl/rxn) 775.2 EUR

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

Q712-02 Vazyme 500 rxns (20 μl/rxn) 128.8 EUR

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

Q712-03 Vazyme 2,500 rxns (20 μl/rxn) 580 EUR

miRNA Universal SYBR® qPCR Master Mix

MQ101-01 Vazyme 125 rxn(20 μl/rxn) 165.6 EUR

miRNA Universal SYBR® qPCR Master Mix

MQ101-02 Vazyme 500 rxn(20 μl/rxn) 290.4 EUR

Genious 2X SYBR GREEN FAST qPCR MIX (No ROX)

RK21205 Abclonal 1 ml Ask for price

2x SYBR Green qPCR Master Mix

B21203 Bimake 25 mL 1027.2 EUR

2x SYBR Green qPCR Master Mix

B21202 Bimake 5 mL 268.8 EUR

2x SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX)

B21702 Bimake 5 ml 268.8 EUR

2x SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX)

B21703 Bimake 25 ml 1027.2 EUR

2x SYBR Green qPCR Master Mix (High ROX)

B21402 Bimake 5 ml 268.8 EUR

2x SYBR Green qPCR Master Mix (High ROX)

B21403 Bimake 25 ml 1027.2 EUR

HotTaq Probe qPCR Universal Mix

BT11004 Bioatlas 250rxn 147.6 EUR

HotTaq EvaGreen qPCR Universal Mix

BT11104 Bioatlas 250rxn 165.6 EUR

SYBR Green qPCR Master Mix

HY-K0501 MedChemExpress 5 mL (500 rxns) 315.6 EUR

Universal qPCR Mixture

QPCR1000-UNIV Bio Basic 4X1.25ml 331.44 EUR

Ultra SYBR Green qPCR Master Mix (2X, with ROX I)

W2601-1 101Bio - Ask for price

Ultra SYBR Green qPCR Master Mix (2X, with ROX I)

W2601-5 101Bio - Ask for price

SYBR Green qPCR Master Mix (No ROX)

HY-K0523 MedChemExpress 5 mL (500 rxns ) 308.4 EUR

SYBR Green qPCR Master Mix (Low ROX)

HY-K0522 MedChemExpress 5 mL (500 rxns ) 308.4 EUR

AceQ qPCR SYBR® Green Master Mix

Q111-02 Vazyme 500 rxn (20 μl/rxn) 265.2 EUR

AceQ qPCR SYBR® Green Master Mix

Q111-03 Vazyme 2500 rxn (20 μl/rxn) 775.2 EUR

SYBR Green qPCR Master Mix (High ROX)

HY-K0521 MedChemExpress 1 mL (100 rxns) 135.6 EUR

Universal tiered rack green colour

DD64013 Scientific Laboratory Supplies EACH 37.2 EUR

QPCR Kit DNA Universal f

MOL6606 Scientific Laboratory Supplies EACH 1118.9 EUR

QPCR Kit DNA Universal m

MOL6610 Scientific Laboratory Supplies EACH 1118.9 EUR

Genious 2X SYBRGREEN FAST qPCR MIX (Low ROX)

RK21206 Abclonal 1 ml Ask for price

QPCR Kit DNA Universal f Mmix

MOL6608 Scientific Laboratory Supplies EACH 1406.13 EUR

QPCR Kit DNA Universal m Mmix

MOL6612 Scientific Laboratory Supplies EACH 1406.13 EUR

Universal miRNA qPCR Primer (10 µM)

abx298006-200ul Abbexa 200 ul 226.8 EUR

5min Universal Ligation Mix

C311-01 Vazyme 50 rxn 256.8 EUR

5min Universal Ligation Mix

C311-02 Vazyme 100 rxn 339.6 EUR

SeraMir 3'-Universal Primer (10,000 qPCR reactions)

RA800P-3 SBI 10,000 reactions 125 EUR

Select 30ml Universal Container PS Green Cap Plain Label

SLE7504G Scientific Laboratory Supplies PK400 93.6 EUR

QuantiMir 3'-Universal Primer (10,000 qPCR reactions)

RA420AU-3 SBI 10,000 assays 125 EUR

10 × Universal Primer Mix (UPM)

RA102-01 Vazyme 100 rxns (5 μl/rxn) 58 EUR

Wire Rack 2x 6 Universal

STA20020 Scientific Laboratory Supplies EACH 36 EUR

TAQuestâ„¢ FAST qPCR Master Mix with Helixyteâ„¢ Green *No ROX*

17276-1mL AAT Bioquest 1 mL 99 EUR

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17277-5mL AAT Bioquest 5 mL 308 EUR

AceQ Universal Probe Master Mix V2

Q513-EN02 Vazyme 500 rxns (20 μl/rxn) 130.11 EUR

AceQ Universal Probe Master Mix V2

Q513-EN03 Vazyme 2,500 rxns (20 μl/rxn) 579.6 EUR

TAQuestâ„¢ FAST qPCR Master Mix with Helixyteâ„¢ Green *Low ROX*

17278-1mL AAT Bioquest 1 mL 99 EUR

TAQuestâ„¢ FAST qPCR Master Mix with Helixyteâ„¢ Green *Low ROX*

17279-5mL AAT Bioquest 5 mL 308 EUR

TAQuestâ„¢ FAST qPCR Master Mix with Helixyteâ„¢ Green *High ROX*

17280-1mL AAT Bioquest 1 mL 99 EUR

TAQuestâ„¢ FAST qPCR Master Mix with Helixyteâ„¢ Green *High ROX*

17281-5mL AAT Bioquest 5 mL 308 EUR

AceQ U+ Universal Probe Master Mix V2

Q513-02 Vazyme 500 rxn (20 μl/rxn) 320.4 EUR

AceQ U+ Universal Probe Master Mix V2

Q513-03 Vazyme 2500 rxn (20 μl/rxn) 1010.4 EUR

Amplite® Universal Fluorimetric MMP Activity Assay Kit *Green Fluorescence*

13510 AAT Bioquest 100 Tests 334 EUR

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13510-100Tests AAT Bioquest 100 Tests 334 EUR

TAQuest™ FAST qPCR Master Mix with Helixyte™ Green *No ROX*

17276 AAT Bioquest 1 mL 99 EUR

TAQuest™ FAST qPCR Master Mix with Helixyte™ Green *No ROX*

17277 AAT Bioquest 5 mL 308 EUR

Amplite® Universal Fluorimetric Protease Activity Assay Kit *Green Fluorescence*

13500 AAT Bioquest 500 Tests 222 EUR

TAQuest™ FAST qPCR Master Mix with Helixyte™ Green *Low ROX*

17278 AAT Bioquest 1 mL 99 EUR

TAQuest™ FAST qPCR Master Mix with Helixyte™ Green *Low ROX*

17279 AAT Bioquest 5 mL 308 EUR

TAQuest™ FAST qPCR Master Mix with Helixyte™ Green *High ROX*

17280 AAT Bioquest 1 mL 99 EUR

TAQuest™ FAST qPCR Master Mix with Helixyte™ Green *High ROX*

17281 AAT Bioquest 5 mL 308 EUR

qPCR plate-foil universal (for Real-time PCR, Light Cycler 480)

A26979 GeneOn 1x100 pcs 223.2 EUR

Amplite® Universal Fluorimetric Protease Activity Assay Kit *Green Fluorescence*

13500-500Tests AAT Bioquest 500 Tests 222 EUR

VAHTS HiFi Universal Amplification Mix for Illumina

N618-01 Vazyme 24 rxns 30.8 EUR

VAHTS HiFi Universal Amplification Mix for Illumina

N618-02 Vazyme 96 rxns 107.2 EUR

VAHTS HiFi Universal Amplification Mix for MGI (SI)

NM618-01 Vazyme 24 rxns 30.8 EUR

VAHTS HiFi Universal Amplification Mix for MGI (SI)

NM618-02 Vazyme 96 rxns 107.2 EUR

Forget-Me-Notâ„¢ Universal Probe Master Mix (500 reactions)

31043-1 Biotium 1kit 396 EUR

Forget-Me-Notâ„¢ Universal Probe Master Mix (100 reactions)

31043-T Biotium 1kit 136.8 EUR

ChamQ SYBR qPCR Master Mix

Q311-02 Vazyme 500 rxns (20 μl/rxn) 96.44 EUR

ChamQ SYBR qPCR Master Mix

Q311-03 Vazyme 2,500 rxns (20 μl/rxn) 434.8 EUR

FastPure Universal Plant Total RNA Isolation Kit

RC411-01 Vazyme 50 rxns 100 EUR

Eztime Real - time PCRPremix 2x,SYBR Green

FYT103-100P Yeastern Biotech 100 Preps 1.25 ml Ask for price

Eztime Real - time PCRPremix 2x,SYBR Green

FYT103-400P Yeastern Biotech 400 Preps 1.25 ml x 4 Ask for price

Forget-Me-Notâ„¢ Universal Probe Master Mix with ROX (500 reactions)

31044-1 Biotium 1kit 396 EUR

Forget-Me-Notâ„¢ Universal Probe Master Mix with ROX (100 reactions)

31044-T Biotium 1kit 136.8 EUR

qPCR SybrMasterMaster mix for real-time qPCR with SYBR® Green fluorescent DNA stain** shipped ice packs - must be shipped via overnight service

M-PCR-372L MiTeGen 10 x 1,25 ml 818 EUR

qPCR SybrMasterMaster mix for real-time qPCR with SYBR® Green fluorescent DNA stain** shipped ice packs - must be shipped via overnight service

M-PCR-372S MiTeGen 2 x 1,25 ml 205 EUR

ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix

Q411-02 Vazyme 500 rxns (20 μl/rxn) 112.5 EUR

ChamQ SYBR Color qPCR Master Mix

Q411-03 Vazyme 2,500 rxns (20 μl/rxn) 507.2 EUR

Universal platform

INC1112 Scientific Laboratory Supplies EACH 1434 EUR

Universal Attachment

MIX1320 Scientific Laboratory Supplies EACH 286.8 EUR

qPCR SybrMaster lowROXMaster mix for real-time qPCR with SYBR® Green fluorescent DNA stain** shipped ice packs - must be shipped via overnight service

M-PCR-373L MiTeGen 10 x 1,25 ml 818 EUR

qPCR SybrMaster lowROXMaster mix for real-time qPCR with SYBR® Green fluorescent DNA stain** shipped ice packs - must be shipped via overnight service

M-PCR-373S MiTeGen 2 x 1,25 ml 205 EUR

qPCR SybrMaster UNGMaster mix for real-time qPCR with SYBR® Green fluorescent DNA stain** shipped ice packs - must be shipped via overnight service

M-PCR-375L MiTeGen 10 x 1,25 ml 982 EUR

qPCR SybrMaster UNGMaster mix for real-time qPCR with SYBR® Green fluorescent DNA stain** shipped ice packs - must be shipped via overnight service

M-PCR-375S MiTeGen 2 x 1,25 ml 246 EUR

Universal V1-Puck

M-CP-111-021 MiTeGen 1 PUCK 350 EUR

Universal Oven UN30

OVE8314 Scientific Laboratory Supplies EACH 1672.8 EUR

Universal Oven UN55

OVE8316 Scientific Laboratory Supplies EACH 1952.4 EUR

Universal Oven UN75

OVE8318 Scientific Laboratory Supplies EACH 2028 EUR

Universal Oven UF30

OVE8332 Scientific Laboratory Supplies EACH 1911.6 EUR

Universal Oven UF55

OVE8334 Scientific Laboratory Supplies EACH 2306.4 EUR

Universal Oven UF75

OVE8336 Scientific Laboratory Supplies EACH 2433.6 EUR

UNIVERSAL BEER AGAR

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U21-100-2kg Alphabiosciences 2kg 444 EUR

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U21-100-500g Alphabiosciences 500 g 164.4 EUR

Grant Universal Tray

BAT4622 Scientific Laboratory Supplies EACH 314.4 EUR

Universal AC adapter

PIP3214 Scientific Laboratory Supplies EACH 78 EUR

Universal Oven UN110

OVE8320 Scientific Laboratory Supplies EACH 2598 EUR

Universal Oven UN160

OVE8322 Scientific Laboratory Supplies EACH 3133.2 EUR

f. Inkonsistenter Grenzwertsatz: Stellen Sie beim Vergleich der qPCR-Ergebnisse in verschiedenen Platten sicher, dass der Grenzwert für alle Experimente gleich ist.

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